通过恒温水槽对五灵脂的质量标准分析

五灵脂(Faecestrogopterori)为鼯鼠科动物复齿 鼯鼠(Trogopterusxanthipes)的 干 燥 粪 便,其 性 温,味咸､甘,归肝､心经,具有活血､化瘀和止痛的功 效,主治胸肋､脘腹刺痛､痛 经､经 闭､产 后 血 瘀 疼 痛､跌扑肿痛､蛇虫咬伤､心血管和妇科疾病｡作 为传统中药,五灵脂已被广泛应用｡在商洛,养殖鼯 鼠被作为广大农民脱贫致富奔小康的主要产业而被 大力发展｡现有的质量标准《中国药典》1977年版和 1990年版仅记 载 其 来 源 和 性 状,《陕西 省 药 材 标 准》 2015年版虽然增加了其显微和薄层色谱,但 未 有 指 标性成分 TLC鉴别和含量测定,一些不法商贩趁机 唯利是图,以老鼠和其他动物粪便冒充五灵脂,更有 甚者将泥土和侧柏叶粉碎后用机器制作假冒五灵脂｡ 为了给药品监督管理部门严厉打击制售假冒伪劣五 灵脂提供技术支撑,本文在对五灵脂化学成分研究的 基础上对五灵脂的几种药用成分进行 HPLC 分 析,以期提供更科学､规范的质量控制标准。

Waterse2695型高效液相色谱仪(美国沃特世公司);赛多利斯SQP型电子分析天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司);DK-8D型电热恒温水 槽(上海精宏实验设备有限公司);四号药筛(湖南省常德粒度分析仪器厂)。

槲皮素对照品(批号100081-200907,质 量分 数 为 96.5%),山 柰 素 对 照 品 (批 号 110861- 201611,质量分数为95.5%)和穗花杉双黄酮对照品 (批号110729-200411,质量分数为97.7%),均购 自 中国食品药品检定研究院;五灵脂样品(分别购自陕 西省商州区､山 阳 县 和 丹 凤 县);甲醇,色 谱 纯(美 国 SigmaAldrich公司);水,超纯水(上海和泰仪器有限 公司 HHitech纯水机现制)。

精密称取五灵脂样品(商州区3批,丹凤县3批,山阳 县3批以及商州区野生2批)粉末(过四号筛)3.0g,置于索氏提取器中,加乙醚适量,加热回流至提取液 无色,弃 去 乙 醚 液,药 渣 挥 干 乙 醚,加 体 积 分 数 为 70%的乙醇50mL,加热回流1h,趁热滤过,滤液蒸 干,残渣加水25mL使溶解,加盐酸5mL,100 ℃加 热水解 45 min,立 即 冷 却,用 乙 酸 乙 酯 振 摇 提 取 3 次,每次20mL,合并乙酸乙酯液,用水洗涤3次,每 次20mL,水浴蒸干,残渣加甲 醇10mL 使溶 解,作 为供试品溶液｡精密称取槲皮素､山柰素和穗花杉双 黄酮对照品适量,加乙醇制成质量浓度分别为0.1, 0.2和0.1mg·mL-1的混合对照品溶液,再精密称 取槲皮素､山柰素和穗花杉双黄酮对照品适量,加乙 醇制成质量浓度分别为0.5,0.2和0.5mg·mL-1 的对照品溶液｡分别吸取上述供试品溶液､混合对照 品溶液和对照品溶液各5μL,点于同一硅胶 G 薄层 板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶2∶1)2~8 ℃的上 层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10mL·L-1 的三氯化铝乙醇溶液,置 于 紫 外 光 灯 365nm 处检 视｡供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点｡见图1。

流动相为甲醇(A)-4mL·L-1磷 酸溶液(B)(60∶40);流速为0.8mL·min-1;波长 为375nm;柱温为25℃;进样体积为10μL

精密称取槲皮素､山柰素 和穗花杉双黄酮对照品适量,分别加甲醇溶解并定容 至刻度,制成含槲皮素､山柰素和穗花杉双黄酮对照品 质量浓度分别为0.054,0.188和0.223mg·mL-1的混 合对照品溶液。

精密称取五灵脂样品(山阳 县)3.0g,研细,过四号筛,置于索氏提取器中,加 乙 醚60mL,加热回流至提取液无色,弃乙醚液,药渣挥 干乙醚,加入体 积 分 数 为70%的乙 醇 溶 液100mL, 加热回流1h,趁热过滤,蒸干滤液,残渣加水25mL使溶解,加盐酸6mL,100 ℃加热水解45min,立即 冷却,用乙酸乙酯振摇提取3次,每次20mL,合并乙 酸乙酯液,用水洗涤3次,每次10mL,用乙酸乙酯液 减压回收溶剂,残渣加甲醇使溶解,分次移至10mL 量瓶中,加甲醇 定 容 至 刻 度,摇 匀,过0.45μm 微孔 滤膜,即得。

图１ ＴＬＣ图 １．混合对照品

3 讨论

五灵脂提取方法的选择 本 研 究 参 考 已 有 文 献，分别选取体积分数为５０％，７０％和９０％的乙醇及 甲醇－２５％盐酸溶液（４∶１）为提取溶剂，回流１ｈ，发 现体积分数为７０％的乙 醇 提 取 效 果 最 好；对 加 入 的 盐酸量的控制分别比较了３，５和６ｍＬ，发现加入的 盐酸量会直接影响水解效果和３个成分的含量高低， 实验结果表明，样品在其他条件不变的情况下，加入 ６ｍＬ盐酸时３个成分含量最高；经过对水解温度的 考察，样品在其 他 条 件 不 变 的 情 况 下，分 别 在５０，８０ 和１００℃进行水解，液相含量测定结果显示在１００℃ 下水解的样品，峰形分离度最好，峰面积最优，理论塔 板数最佳，故选择水解温度为１００ ℃。