恒温水浴锅在苄嘧磺隆的抗药性的使用

水稻在我国粮食生产中占主要地位，其产量的保证 对我国粮食丰收具有重大意义。目前，影响我国水稻产 量的杂草主要有23种，其中萤蔺对水稻的危害极其严 重。萤蔺(Scirpus juncoides Roxb.)又名灯心藨草，是稻田 多年生湿生性莎草科杂草，以种子繁殖为主，具有旺盛的 生命力、惊人的繁殖能力、顽强的低抗力和再生能力，适应 干燥、耐涝、严寒、盐碱等恶劣环境，并与水稻竞争生态 环境。苄嘧磺隆(bensulfuron-methyl)是稻田常用的乙酰乳 酸合成酶(ALS)抑制剂类除草剂，主要防除一年生和多年 生阔叶杂草和莎草等，长期重复使用致使杂草对其产生 了抗药性，目前全球已对苄嘧磺隆产生抗药性杂草已有 28种。

采自东北三省多年使用苄嘧磺隆的稻田里的萤蔺 种子，具体地点及用药历史见表1。

1.1.2 供试药剂

10%苄嘧磺隆可湿性粉剂(bensulfuron-methyl WP)， 上海杜邦农化有限公司；BCA Protein Assay Kit，康为世 纪生物科技有限公司；3-羟基丁酮(acetoin)标样、甲基磺 酰氟液(phenylmethylsulphonyl fluoride，PMSF)、二硫苏糖 醇 (dithiothreito，DTT)、可溶性聚乙烯吡咯烷酮(soluble PVP)、N-(2 -羟乙基) 哌嗪-N′ -2 -乙烷磺酸 [N-(2 - hydroxyethyl) piperazine -N -(2 -ethanesulphonic acid)， HEPES]，北京索莱宝科技有限公司；肌酸、氯化硫胺素焦 磷酸(thiamine pyrophosphate，TPP)、黄素腺嘌呤二核苷酸 (flavin adenine dinucleotide，FAD)，美国Sigma-Aldrich公 司；MgCl2、K2HPO4、a-萘酚、硫酸铵等，国药集团化学试剂 有限公司。

喷笔，型号F-470，台湾美事连公司；4、-20 ℃冰箱， 中国海尔集团；-80 ℃冰箱，美国Thermo Forma公司； 制冰机，日本SANYO公司；SpectraMax 190酶标仪，美国 Molecular Devices公司；高速冷冻离心机(台式)，美国 Beckman公司；DK-S26型电热恒温水浴锅，上海精宏实验设备有限公司。

将不同种群萤蔺种子置于铺有双层滤纸的培养皿 中，5 ℃冰箱清水浸泡48 h之后，50 ℃恒温浸泡12 h洗 净，打破休眠，之后用清水将种子冲洗干净，进行萌发试 验(白天/夜晚：30 ℃/26 ℃，湿度：60%~75%，光照/黑暗： 12 h/12 h)培养，每隔48 h用温水冲洗，去除种子表面油脂和蜡脂层。发芽后的萤蔺种子种于直径10 cm、高8.5 cm塑 料无孔花盆内，盖上细土，每个种群播种3盆，放于温室 中培养，当萤蔺长到2~3叶期时，将10%苄嘧磺隆稀释成 不同的剂量(有效含量)，对敏感性萤蔺种群喷施0、0.45、 1.8、9、45、225 g a.i./hm2 6个剂量，对抗药性萤蔺种群喷施 0、1.8、9、45、225、1125 g a.i./hm2 6个剂量，3次重复。对水量为 450 L/hm2 ，喷雾压力为0.25 MPa。

施用苄嘧磺隆后21 d，随着施药量的增加，萤蔺各种 群鲜重均受到不同程度的抑制，20个萤蔺种群对 苄嘧磺隆的抗药性水平差异较大，其中R7、R17和R18抗 药性指数高达90以上；R8、R13、R14和R19对苄嘧磺隆抗 药性达到中等水平；R2、R4和R10对苄嘧磺隆产生低等 水平的抗药性，其他种群对其均产生高等水平的抗药性。离体条件下对萤蔺种群ALS酶活性测定，结果显示， 未使用苄嘧磺隆时，种群R2、R4、R8、R10、R14、R18和 R19的ALS活性与敏感性萤蔺种群S无显著差异，R1、R7、 R11、R17和R20萤蔺种群的ALS活性显著高于敏感性萤 蔺种群S，其他R种群的ALS活性与敏感性萤蔺种群S均有 不同的差异性。不同萤蔺种群ALS酶对苄嘧磺隆 敏感性不同，随着苄嘧磺隆浓度的提高，20个不同种群 的萤蔺ALS酶活性下降程度不同，其中敏感性种群S下降 最为迅速。

研究结果表明：20个萤蔺种群对苄嘧磺隆产生了不 同程度的抗药性，未使用苄嘧磺隆时，不能通过比较ALS 活性高低判断杂草是否为抗药性杂草或者比较其抗药 性水平的高低；使用苄嘧磺隆时，萤蔺种群的ALS对苄嘧 磺隆的敏感性均有所降低，与整株生物测定的杂草抗药 性降低趋势一致，因此，萤蔺产生抗药性的原因可能是 ALS对苄嘧磺隆敏感性的降低所致，与有关杂草对ALS抑 制剂产生抗药性的研究结论基本一致。