精宏对小花清风藤化学成分的分离的研究

小花清风藤为清风藤科（Sabiaceae）清风藤属 Sabia Colelbr. 植物小花清风藤 Sabia parviflora Wall. ex Roxb. 的干燥茎和叶，是布依族、苗族药物，俗称“小黄药、雅希强（布依族语）、黄肿药、黄眼 药”等。其味苦，性微寒，具有清热利湿、止血 之功效。用于湿热黄疸、外伤出血。

1 仪器与材料

Bruker avance 600 型核磁共振仪（德国布鲁克 公司）；Triple TOF 5600 高分辨质谱仪（美国 ABSciex 公司）；EYALA 旋转蒸发器（日本 Eyala 公司）；上海精宏DHG-9036A 型电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；EL204 电子天平 [梅特勒托利多仪器（上海）有限公司]；LC-XR20UPLC/ HPLC（日本岛津公司）；Agilent 1100 Series 制备液 相色谱（美国 Agilent 公司）；Waters 2487 制备液相 色谱（美国 Waters 公司）；DAION HP20 树脂（日 本三菱公司）；半制备液相和制备液相所用试剂为色 谱纯，其他均为分析纯。 小花清风藤药材于2014年6月采自贵州省安顺 市紫云县猫营镇，由江西中医药大学钟国跃教授鉴 定为清风藤属植物小花清风藤 Sabia parvifloraWall. ex Roxb. 的干燥茎和叶，标本（WSZ201412） 保存在江西中医药大学。

2 提取与分离

取 17 kg 小花清风藤药材，10 倍量 70%乙醇回 流提取 3 次，时间分别为 3.0、1.5、1.5 h，减压浓 缩得浸膏。用 95%乙醇将浓缩液中乙醇体积分数稀 释至 20%，之后经 HP-20 离子交换树脂分离，洗脱 剂分别为 30%、50%、70%、95%乙醇。浓缩，干 燥后得 30%乙醇洗脱部位 258 g、50%乙醇洗脱部位 94 g、70%乙醇洗脱部位 38 g 和 95%乙醇洗脱部位 79 g。取 30%乙醇洗脱部位总浸膏经硅胶柱色谱分 离，以二氯甲烷-甲醇溶剂系统梯度洗脱，得到 23 个流分 A～W。P 经过中压 ODS 反相色谱柱，以甲 醇-水溶剂系统（10%、20%、30%）梯度洗脱，再经 半制备型HPLC制备，得化合物1（2.3 mg）、2（4.5mg）、 3（6.6 mg）、4（24.6 mg）、5（134.4 mg）。Q 经过中 压 ODS 反相柱色谱，以甲醇-水溶剂系统（10%、20%、 30%、50%）梯度洗脱，再经凝胶 LH-20 甲醇-水溶剂 系统（0∶100→100∶0）梯度洗脱，再经半制备型 HPLC 制备，得化合物 6（3.5 mg）、7（181.1 mg）、8（7.5 mg）、 9（2.4 mg）、10（27.4 mg）、11（17.6 mg）。S 经过反 复硅胶柱以及半制备 HPLC 制备，得化合物 12（43.5 mg）、13（14.3 mg）、14（23.5 mg）、15（14.3 mg）。

3 结构鉴定

化合物 1：白色粉末（甲醇），ESI-MS m/z: 167 [M－H]− 。1 H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 7.21 (3H, s, H-2, 4, 6), 3.80 (9H, s, H-1, 3, 5)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 149.8 (C-3, 5), 107.3 (C-2, 4, 6), 57.0 (-OCH3)。以上数据与报道一致， 故鉴定化合物 1 为 1,3,5-三甲氧基苯。

化合物 2：白色粉末（甲醇），ESI-MS m/z: 353 [M＋Na]+ 。1 H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 7.49 (1H, brd, J = 3.3 Hz, H-2), 7.48 (1H, brd, J = 8.2 Hz, H-6), 7.11 (1H, d, J = 8.9 Hz, H-5), 5.00 (1H, d, J = 7.4 Hz, H-1′), 3.80 (3H, s, 3-OCH3), 3.67 (1H, brd, J = 11.2 Hz, H-6′a), 3.46 (1H, dd, J = 11.9, 5.6 Hz, H-6′b), 3.26～3.46 (3H, m, H-3′～5′), 3.18 (1H, t, J = 9.1 Hz, H-2′)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 173.4 (C-7), 148.7 (C-3, 4), 130.1 (C-1), 122.9 (C-6), 114.5 (C-2), 113.3 (C-5), 100.1 (C-1′), 77.5 (C-5′), 77.6 (C-3′), 73.3 (C-2′), 70.0 (C-4′), 61.0 (C-6′), 56.0 (-OCH3)。以 上数据与报道基本一致，故鉴定化合物 2 为 香草醛 4-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物 3：白色粉末（甲醇），ESI-MS m/z: 345 [M－H]− 。1 H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 6.61 (2H, s, H-3, 5), 4.40 (2H, brs, H-7), 4.84 (1H, d, J = 6.9 Hz, H-1′), 3.10～3.65 (6H, m, H-2′～6′), 3.72 (6H, s, 2×-OCH3)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 131.6 (C-1), 153.1 (C-2,6), 104.5 (C-3,5), 135.6 (C-4), 63.3 (C-7), 102.8 (C-1′), 74.6 (C-2′), 77.8 (C-3′), 70.4 (C-4′), 77.0 (C-5′), 61.3 (C-6′), 56.9 (2-×OCH3)。以 上数据与报道基本一致，故鉴定化合物 3 为 2,6-二甲氧基-4-羟基苄醇 1-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物 4：白色粉末（甲醇），ESI-MS m/z: 295 [M－H]− 。1 H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 7.95 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-4), 6.37 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-5), 5.8 (1H, s, H-2), 3.83 (1H, m, H-3′), 2.24 (1H, ddd, J = 1.3, 7.0, 14.3 Hz, H-2′a), 2.05 (3H, s, 3-CH3), 1.88 (1H, ddd, J = 1.2, 7.0, 13.5 Hz, H-4′a), 1.82 (1H, m, H-2′b), 1.71 (1H, m, H-4′b), 1.32 (3H, s, 1′-CH3), 1.05 (3H, s, 5′-CH3)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 179.6 (C-6′), 147.9 (C-3), 131.9 (C-4), 130.1 (C-5), 120.3 (C-2), 88.5 (C-1′), 81.4 (C-7′), 63.8 (C-3′), 52.1 (C-5′), 40.8 (C-2′), 39.5 (C-4′), 19.6 (3-CH3), 17.1 (1′-CH3), 13.1 (5′-CH3)。以上数据与报道基本一 致，故鉴定化合物 4 为 rel-5-(3S,8S-dihydroxy1R,5S-dimethyl-7-oxa-6-oxobicyclo [3,2,1]-oct-8-yl)- 3-methyl-2Z,4E-penta-dienoic acid。

化合物 5：白色粉末（甲醇），ESI-MS m/z: 155 [M＋H]+ 。1 H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 7.45 (1H, brs, H-2), 7.42 (1H, d, J = 8.3 Hz, H-6), 6.78 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-5)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 169.2 (C = O), 150.1 (C-4), 144.5 (C-3), 122.7 (C-6), 121.7 (C-1), 116.4 (C-5), 114.5 (C-2)。以上数据与文 献报道对比，鉴定化合物 5 为原儿茶酸。

化合物 6：白色粉末（甲醇），ESI-MS m/z: 188 [M－H]− 。1 H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 11.35 (1H, brs, -COOH), 8.03 (1H, dd, J = 1.2, 8.0 Hz, H5), 7.95 (1H, d, J = 8.3 Hz, H-7), 7.57 (1H, m, H-8), 7.24 (1H, m, H-6), 6.48 (1H, s, H-3)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 140.0 (C-2), 108.0 (C-3), 178.8 (C-4), 125.1 (C-5), 122.9 (C-6), 131.6 (C-7), 119.8 (C-8), 140.3 (C-9), 125.8 (C-10), 163.3 (C-11)。以上 数据与报道基本一致，故鉴定化合物 6 为 4- 喹啉酮-2-羧酸。

化合物 7：白色针晶（甲醇），ESI-MS m/z: 19[M－H]− 。1 H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 7.24 (2H, s, H-2, 6), 3.81 (6H, s, 3, 5-OCH3), 3.71 (3H, s, 4-OCH3)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 127.5 (C-1), 106.9 (C-2, 6), 153.1 (C-3, 5), 140.7 (C-4), 166.4 (COOH), 56.3 (3, 5-OCH3), 60.5 (4-OCH3)。以 上数据与报道基本一致，故鉴定化合物 7 为 3,4,5-三甲氧基苯甲酸。

化合物 8：白色结晶（甲醇），ESI-MS m/z: 109 [M－H]− 。1 H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 6.76 (2H, d, J = 8.6 Hz, H-2, 5), 7.84 (2H, d, J = 8.7 Hz, H-3, 4)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 161.5 (C-1, 6), 131.5 (C-3, 4), 114.4 (C-2, 5)。以上数据与报道 基本一致，故鉴定化合物 8 为邻苯二酚。

化合物 9：白色粉末（甲醇），ESI-MS m/z: 383 [M＋Na]+ 。1 H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 7.23 (2H, s, H-2, 6), 5.11 (1H, d, J = 7.1 Hz, H-1′), 3.16 (1H, m, H-2), 3.22 (1H, m, H-3), 3.14 (1H, m, H-4), 3.41 (1H, m, H-5), 3.58 (1H, m, H-6′a), 3.06 (1H, m, H-6′b), 3.81 (6H, s, 2×-OCH3) ； 13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 127.3 (C-1), 107.7 (C-2), 152.6 (C-3), 138.3 (C-4), 152.6 (C-5), 107.7 (C-6), 102.5 (C-1′), 74.6 (C-2′), 77.1 (C-3′), 70.3 (C-4′), 77.1 (C-5′), 61.2 (C-6′), 56.8 (2×-OCH3)。以上数据与报道基本一致， 故鉴定化合物 9 为丁香酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物 10：白色粉末（甲醇），ESI-MS m/z: 405 [M－H]− 。1 H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 6.52 (2H, s, H-2, 6), 4.84 (1H, d, J = 7.4 Hz, H-7), 3.76 (1H, m, H-8), 3.60 (1H, dd, J = 11.8, 2.1 Hz, H-9a), 3.42 (1H, dd, J = 11.7, 5.5 Hz, H-9b), 4.85 (1H, d, J = 7.4 Hz, H-1′), 3.44 (1H, m, H-2′), 3.42 (1H, m, H-3′), 3.36 (1H, m, H-4′), 3.22 (1H, m, H-5′), 3.68 (1H, brd, J = 13.1 Hz, H-6′a), 3.58 (1H, dd, J = 13.1 5.5 Hz, H-6′b), 3.74 (6H, s, 2×-OCH3), 3.41 (1H, m, H-5), 3.58 (1H, m, H-6′a), 3.06 (1H, m, H-6′b) ；13C-NMR (150 MHz, CD3CD) δ: 135.8 (C-1), 108.1 (C-2), 152.7 (C-3), 133.2 (C-4), 152.7 (C-5), 108.1 (C-6), 74.1 (C-7), 74.8 (C-8), 62.7 (C-9), 103.3 (C-1′), 72.8 (C-2′), 77.0 (C-3′), 70.4 (C-4′), 77.6 (C-5′), 61.4 (C-6′), 56.8 (2×-OCH3)。以上数据与报道基本一致，故 鉴定化合物 10 为 (−)-(7α,8S)-erythro-1-C-syringyl glycerol 4-O-β-D-glucopyranoside。

化合物 11：白色针晶（甲醇），ESI-MS m/z: 199 [M－H]− 。1 H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 3.80(6H, s, 3, 5-OCH3), 7.22 (2H, s, H-2, 6)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 121.6 (C-1), 106.6 (C-2, 6), 147.1 (C-3, 5), 139.4 (C-4), 167.7 (-COOH), 55.7 (3, 5-OCH3)。以上数据与报道一致，故鉴定化 合物 11 为 3,4,5-三甲氧基苯甲酸。

化合物 12：白色针晶（甲醇），ESI-MS m/z: 149 [M＋Na]+ 。1 H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 7.35 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-3), 7.27 (1H, dd, J = 1.3, 8.1 Hz, H-5), 6.75 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-2)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 123.6 (C-1), 145.8 (C-2), 115.6 (C-3, 5), 151.3 (C-4), 118.8 (C-6)。以上数据与报 道一致，故鉴定化合物 12 为 1,2,4-苯三酚。

化合物 13：白色针晶（甲醇），ESI-MS m/z: 193 [M－H]− 。1 H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 7.50 (1H, d, J = 15.8 Hz, H-7), 7.30 (1H, d, J = 1.6 Hz, H-2), 7.130 (1H, d, J = 6.7 Hz, H-6), 6.80 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-5), 6.44 (1H, d, J = 15.7 Hz, H-8), 3.82 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 130.1 (C-1), 111.7 (C-2), 150.1 (C-3), 149.5 (C-4), 113.8 (C-5), 117.4 (C-6), 144.4 (C-7), 122.7 (C-8), 171.6 (C-9), 56.1 (-OCH3)。以上数据与报道基本一 致，故鉴定化合物 13 为阿魏酸。

化合物 14：白色针晶（甲醇），ESI-MS m/z: 167 [M－H]− 。1 H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 7.45 (2H, m, H-5, 6), 6.82 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-7), 3.81 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 167.9 (C-7), 151.5 (C-4), 147.6 (C-3), 123.9 (C-6), 123.4 (C-1), 115.5 (C-5), 113.2 (C-2), 56.0 (-OCH3)。 以上数据与报道基本一致，故鉴定化合物 14 为香草酸。

化合物 15：无色针晶（甲醇），ESI-MS m/z: 137 [M－H]− 。1 H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 7.85 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-2, 6), 6.78 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-3, 5)；13C-NMR (150 MHz, CD3CD) δ: 168.7 (C = O), 161.9 (C-4), 131.5 (C-2, 6), 121.4 (C-1), 114.6 (C-3, 5)。以上数据与报道基本一致，故鉴定化合 物 15 为对羟基苯甲酸。




 

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