大鼠血清脑肠肽影响的分析（精宏DK-S22使用）

失眠是一种十分普遍的疾病，在睡眠障碍中受到 主要的关注，失眠患者的主要表现有入睡困难、睡眠 质量下降和睡眠时间减少等表现 。不仅如此，长期失 眠还可以造成记忆功能下降、注意功能下降、计划功 能下降，从而导致白天困倦，工作能力降低，在停止工 作时容易出现日间嗜睡现象。

一、实验材料

1.实验动物

动物由长春市亿斯实验动物 技 术 有 限 责 任 公 司 （动 物 许 可 证 号 ：SCXK （吉） - 2016- 0003，序号201900026508） 提供，wistar大鼠30 只，体重200—220g。实验场所：长春中医药大学针灸 经络研究所。

2.饲养环境

室内温度控制在20℃—22℃，相对湿 度45%—65%，自然光，避免噪声和其他干扰。将30只 大鼠先适应性喂养7天，大鼠自由进食饲料和水，垫料 保持干燥，7天后称量体重。普通饲料按国家实验动物 饲养成分统一标准配置 。

二、实验分组

大鼠正常喂养1周后，按体重随机分组，分为模型 组、药物组、推拿组，每组大鼠按自然序号进行标记， 采用荧光涂抹技术，在大鼠身上用黄色荧光笔进行标记。

三、实验药物与设备

（一）实验药物 对苯丙氨酸 （PCPA），美国Sigma公司，CAS NO. 742400- 2。人参归脾丸，贵州同济堂制药有限公司，批 号：国药准字Z20010033。配水为汤。戊巴比妥钠，国药集团化学试剂有限公司，批号：WS20130601。p物质 试剂盒：南京建成生物工程研究所，p物质冻干粉，批 号：KIT2019012。β内啡肽试剂盒：南京建成生物工程 研究所，β内啡肽冻干粉，批号：KIT2019016。
（二）实验仪器 上海精密科学仪器有限公司JY10001电子秤；赛 多利斯科学仪器北京有限公司BSA124S- CW精密电子 秤；酶标仪：伯腾酶标仪BIOTek- SMAT；恒温水浴箱： 精宏DK-S22。

四、实验方法

（一）实验动物的失眠造模 30只大鼠同时进行失眠造模，造模采用腹腔注射 PCPA混悬液，连续注射2天，RCPA临用 前 按 大 鼠 100mg/kg用量，用弱碱性生理盐水配置成混悬液备用， 第一次腹腔注射36小时后，大鼠出现昼夜节律缺失， 白天与夜晚皆活动不断，造模大鼠腹腔注射戊巴比妥 30mg/Kg（预实验测得引起100%大鼠睡眠的最小剂 量）。提起大鼠尾巴，将大鼠腹部朝上放在垫块上记 录大鼠的睡眠潜伏期及睡眠持续时间，以翻正反射消 失为发生睡眠。以翻正反射，提示造模成功。
（二）实验方法 1.模型组：每天按照正常标准喂食、喂水。 2.药物组：每天按照人∶大鼠=1∶30的比例，对药 物组大鼠灌胃按体重转毫升数。 3.推拿组：取穴及部位：中脘、神阙、中极，腹部。手 法：摩法、振法。以爽身粉为推拿介质，以脐为中心顺 时针掌摩全腹5分钟，以调畅气机；双手指腹加团揉全腹10分钟，以调脏通腑、平衡阴阳；单掌按振中脘穴 2分钟，单掌掌振神阙穴3分钟，单掌闪振中极穴5分 钟，以健脾和胃，补益气血；随呼吸掌按腹部，以神阙 穴为中心，吸气时深按，吐气时轻抬，时间5分钟，以引 气归元，宁心安神。

五、观测指标

1.p物质。ELISA检测法：腹腔静脉取血5ml，分离 血清，用鼠p物质ELISA检测试剂盒检测血清p物质的 浓度，严格按照试剂盒要求进行操作。于波长450nm的酶仪上读取各孔的OD值。 2.β内腓肽。ELISA检测法：腹腔静脉取血5ml，分离 血清，采用β内啡肽ELISA试剂盒，严格按照试剂盒要求 进行操作。于波长450nm的酶仪上读取各孔的OD值。

六、数据统计

数据分析拟采用SPSS19.0统计软件完成。 ELISA数值计算，采用ELISAAcalc进行计算。数据采用 成组T检验，进行两两对比分析。

七、结果（见下表）


八、讨论

失眠是一种十分普遍的生理心理疾病，有报道称 全球约一半的成年人受到慢性失眠的影响。长期失眠 不仅可以造成免疫力下降、内分泌紊乱、心功能下降 等躯体机能的损伤，还会引起焦虑、注意力下降等心 理功能的紊乱，本项目是通过振腹推拿的方法研究对 失眠大鼠的影响，旨在运用推拿手法帮助解决现在社 会上因生理、心理等原因引起的失眠问题，对于提高 护理的保健意识和社会保健意识有积极的意义。提高 失眠患者对于自身失眠状态的认识和重视程度，加强自我保健意识，帮助解决现在社会上因生理、心理等 原因引起的失眠问题。推拿手法属于中医特色，对身 体没有伤害，属于保健类的治疗方法，和药物治疗相 比，安全性较高，无副作用。通过本研究探讨推拿和失 眠的关系及对失眠大鼠睡眠的改善情况，为临床治疗 失眠提供了相关依据。腹部推拿可以提高失眠大鼠的 p物质和β内啡肽水平，对脑组织及昼夜节律变化有 较好的辅助作用。

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