生化培养箱的微生物群落演替研究

1 材料与方法

果胶酶（30 000 U/g）：山东隆大生物生物工程有限公司； E.Z.N.ATM Mag-Bind Soil脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）Kit试剂盒：美国OMEGA公司；2×Taq Master Mix：南京诺唯赞生物科技有限公司；Qubit 3.0 DNA检测试 剂盒：美国Thermo Fisher Scientific公司。SHP-250生化培养箱：上海精宏实验设备有限公司； 5424台式高速离心机：德国Eppendorf公司；FE20K pH计：瑞 士梅特勒-托利多公司；DYCP-31C水平电泳仪：北京市六一 仪器厂；C1000聚合酶链式反应（polymerase chain reaction， PCR）仪：美国BIO-RAD公司。

2 结果与分析

黑树莓酒的自然AF共进行了7 d，发酵过程中通过测定 还原糖浓度来监测发酵过程。由于酒精发酵过程中酵母是 优势菌群，所以真菌多样性分析成为了黑树莓酒自然AF 的研究重点。在AF的初期（第1天）、中期（第3天）和后期 （第6天）分别取样，记为BU1、BU3和BU6，进行高通量测 序后实施系统分析。随着测 序深度的增加，OTU的数量随之增多，且样品的Shannon曲 线都已经进入平台期阶段。结果表明，测序数量充足，并且 能够反映出黑树莓酒MLF发酵过程当中绝大多数细菌的 信息。还可以增强酒中微生物的稳 定性。在自然发酵的果酒中，Lactococcus和Lactobacillus 的检出率一般较高，本研究中Lactococcus的相对丰度 一直维持在4.44%～17.11%，而Lactobacillus则含量较低， 推测可能是黑树莓酒的高酸度环境抑制了乳杆菌生长， 不利于其增殖。

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