对新生儿ABO溶血病诊断的意义-恒温水槽的使用！

新生儿溶血病（ＨＤＮ）指母婴血型因 ＡＢＯ 血型不合而引起的同种免疫性疾病。ＡＢＯ 血型不合导致的 ＨＤＮ 是 新 生 儿 所 有 的 溶 血 性 疾 病 中 最 常 见 一 种，我 国 人 群 中 ＡＢＯ－ＨＤＮ 发 病 率 为 ２０％ ～ ２５％。

１ 资料与方法

１．１ 一般资料

选择２０１７年４月至２０１８年８月本 院收治的疑似 ＡＢＯ－ＨＤＮ 患儿４８７例，临床上均为母 婴血型不合并伴有高胆红素血症，患儿及母亲血型均 为 Ｒｈ（＋）。其 中 男 ２９２ 例，女 １９５ 例；年 龄 ２ｈ 至 １５ｄ。采集 患 儿 ＥＤＴＡ 抗 凝 静 脉 血 ２～３ ｍＬ 进 行 ＡＢＯ－ＨＤＮ 检测。

１．２ 仪器与试剂

标准 Ａ、Ｂ 血清试剂，标准 ＡＢＯ 红细胞，抗体筛选红细胞采用上海血液生物医药责任 公司产品；酸放散试剂盒采用长春博德生物技术有限 公司产品；所用仪器均采用北京斑珀斯公司的戴安娜 微柱凝胶卡、戴安娜专用离心机、戴安娜专用孵育器； ＤＫ－４２０型电热恒温水槽购自上海精宏实验设备有限 公司。所有的试剂均在有效期内使用。

１．３ 方法

１．３．１ 直接抗人球蛋白试验

取患儿待检测的红细 胞用生理盐水配成１％的悬液５０μＬ，加入戴安娜抗 人球蛋白卡直接离心观察结果。

１．３．２ 游离抗体试验

取戴安娜抗人球蛋白卡标记 １～３孔分别加入１％标准 Ａ、Ｂ、Ｏ 红细胞５０μＬ后再 加入患儿血浆各５０μＬ，进行检测。

１．３．３ 放散细胞准备

将待检血标本以３０００ｒ／ｍｉｎ 离心 １０ ｍｉｎ，吸 取 血 浆 层 放 入 另 一 试 管 备 用。 取 ２ｍＬ剩余的压积红细胞用０．９％生理盐水进行洗涤， 速度为３０００ｒ／ｍｉｎ，离心时间为５ｍｉｎ，洗涤３次后， 在两支试管中分别加入洗涤好的压积红细胞各１ｍＬ， 准备同时进行热放散和酸放散试验。

１．３．４ 热放散试验

依 照 《全 国 临 床 检 验 操 作 规 程》进行操作。在１ｍＬ 的压积红细胞中加入等体 积的生理盐水，混匀，将试管放置在５６ ℃水浴中不断 震动７～８ｍｉｎ，取出后置入预先在５６ ℃水浴箱里预 温的离心套管内，立即以２０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，吸取上层液（即放散液）进行检测。

１．３．５ 酸放散试验

依照厂商的试剂盒的说明书进 行操作。在１ ｍＬ 的压积红细胞加入等体积的溶液 Ⅰ，混匀后，来回轻轻颠倒试管４次，以３０００ｒ／ｍｉｎ 离心１ｍｉｎ，转移上清液至另外一洁净试管。在放散 液中逐滴加入溶液Ⅱ，直至放散液变为蓝色为止（即 放散液由酸性转变为中性）。将中和后的放 散 液 离 心，３０００ｒ／ｍｉｎ离心１ｍｉｎ，上清液用于抗体检测。

１．４ 统计学处理

采用ＳＰＳＳ１９．０对数据进行分析。 计数资料 采 用 百 分 数 表 示，组比较 采 用χ ２ 检 验。 以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。

２ 结 果

４８７例疑似 ＡＢＯ－ ＨＤＮ 患儿中，确诊为 ＡＢＯ－ＨＤＮ 共１３５例，检出率为 ２７．７％（１３５／４８７）；其中母－婴血型为 Ｏ－Ａ 型７０例，Ｏ－ Ｂ型５８例，Ａ－ＡＢ型７例。１３５例 ＡＢＯ－ＨＤＮ 患儿血 样标本中，热 放 散 试 验 和 酸 放 散 试 验 均 为 阳 性 １００ 例，检出率为２０．５％；热放散试验阳性而酸放散试验 阴性６例，检出率为１．２％；热放散试验阴性而酸放散 试验阳性２７例，检出率为５．６％；热放散和酸放散试 验均为阴性，但直接抗人球蛋白试验＋游离抗体释放 试验阳性２例，检出率为０．４％。４８７例患儿中，两种方法联合检测阳性检出率为 ２７．３％（１３３／４８７），酸放散试验阳性检出率为２６．１％， 酸放散试验与两种方法联合检测阳性检出率比较，差 异有统计学意义（χ ２＝４５７．２８，Ｐ＜０．００１）；热放散试 验阳性检出率为２１．８％，热放散试验与两种方法联合 检测 阳 性 检 出 率 比 较，差 异 有 统 计 学 意 义 （χ ２＝ ３６０．６３，Ｐ＜０．００１）。

３ 讨 论 　　

ＡＢＯ－ＨＤＮ 是由于母婴血型不合而引起的免疫 性溶血性疾病，患儿临床表现为水肿、黄疸、贫血、肝 脾肿大，严重者可发生胆红素脑病，导致大脑损伤，引 起智力低下或者不可逆的神经系统后遗症，更甚者威 胁到患儿的生命。因此早发现、早诊断、早治疗，可 以避免后续症状的发生，减轻疾病对患儿造成的损 伤。目前，对 ＡＢＯ－ＨＤＮ 的诊断主要通过 ＡＢＯ－ＨＤＮ ３项试验（直接抗人球蛋白试验、血清游离抗体试验和 红细胞抗体释放试验）进行检测。红细胞抗体释放 试验是诊断 ＡＢＯ－ＨＤＮ 最有力证据，阳性结果表明患 儿红细胞被母体ＩｇＧ 抗 Ａ（Ｂ）抗体致敏。酸放散试 验的原理是低 ｐＨ 值（酸性条件下）可以破坏蛋白质 的静电引力并改变其三级结构，从而致敏红细胞上除 Ｄｕｆｆｙ系统以外的大部分ＩｇＧ 抗体；热放散试验原理 为温度在５６℃时可将红细胞表面结合的ＩｇＭ 类抗体 或 ＡＢＯ 系统ＩｇＧ 类抗体解离，相对于其他放散试验， 热放散试验效果更效显，更适合 ＡＢＯ 系统ＩｇＭ 抗体 的放散。