异黄酮类化合物含量比较-精宏恒温烘箱的使用！

葛根，始载于《神农本草经》，来源于豆科植物野 葛Ｐｕｅｒａｒｉａｌｏｂａｔａ （Ｗｉｌｌｄ．）Ｏｈｗｉ的干燥根，具有 解肌退热、透疹、生津止渴等功效。据文献报道， 葛根中含有丰富的异黄酮类化合物，具有很好的 扩张冠状动脉，降低心肌耗氧量等药理活性。安 徽省是葛根的主产区之一，尤以大别山区和皖南 山区产量大。有文 献 报 道 不 同 产 地 的 葛 根 品 质 存在较大差异，其中安徽省不同产地的葛根中 异黄酮化 合 物 含 量 差 异 也 较 大。在产地调查过程 中，发现葛根存在两种类型。一种葛的根系庞大，块 根扭曲，形状 不 规 则，纤 维 较 多，药 农 称 之 为“柴 性 葛”；另一种 葛 的 块 根 分 枝 少，常 呈 纺 锤 形，粉 性 较 强，药农称之为“粉性葛”。其中“粉性葛”并非是 粉葛，而是野葛中粉性较强的类型。药农认为“粉性 根”质量较差，而葛根的性状与其质量的相关性尚不 清楚，有必要对“粉性葛”与“柴性葛”进行质量评价。

１ 仪器与试药

１．１ 仪器

Ａｇｉｌｅｎｔ１２６０高效液相色谱仪（真空脱 气装置、二 元 泵、ＡＬＳ、ＴＣＣ、ＤＡＤ 和 Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎ 工作站）：Ａｇｉｌｅｎｔ公司；ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＸＤＢ－Ｃ１８色 谱柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，３．５μｍ）：美国 Ａｇｉｌｅｎｔ公 司；ＢＰ２１１Ｄ电子天平：德国Ｓｔａｒｔｏｒｉｕｓ公司；恒温烘箱：上海精宏实验设备有限公司；杰瑞尔 ＨＨ－６数显 恒 温 水 浴 锅：浙江金坛市杰瑞尔电器有限公司； Ｍｉｌｌｉ－Ｑ 超纯水仪：美国 ＭｅｒｃｋＭｉｌｌｉｐｏｒｅ公司。

１．２ 试 药

３′－羟 基 葛 根 素 （批 号 ＣＦＮ９０２３６，纯 度≥９８％）、葛根素（批号 ＣＦＮ９９１６９，纯度≥９８％）、 ３′－甲氧基葛根素（批号 ＣＦＮ９０７８０，纯度≥９８％）、大 豆苷（批号 ＣＦＮ９９１０１，纯度≥９８％）、大豆 苷 元（批 号 ＣＦＮ９８７７４，纯度≥９８％）：武汉天植生物技术有 限公司；葛 根 素 芹 菜 糖 苷 （批 号 Ｇ－０２１－１６１０１９，纯 度≥９８％）：成都瑞芬斯生物科技有限公司；甲醇（色 谱纯）：美国 ＴＥＤＩＡ 公司。 葛根药材于２０１６年１２月采 集，共２６批样 品， 经安徽中医药大学彭华胜教授鉴定为豆科植物野葛的根。选取采挖 葛根的粗大部位，４５ ℃烘干至恒质量，粉碎，过３号 筛，干燥保存。

２ 方法与结果

２．１ 色 谱 条 件

采 用 ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘ ＸＤＢ－Ｃ１８ （２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，３．５μｍ）色谱柱，柱温３０℃，以 甲醇（Ａ）－０．２％醋酸水（Ｂ）为流动相，梯度洗脱（０～ ２５ｍｉｎ，２３％ Ａ；２５～３５ｍｉｎ，２３％ Ａ→４０％ Ａ；３５～４８ ｍｉｎ，４０％ Ａ→６５％ Ａ；４８～５０ ｍｉｎ，６５％ Ａ→ ２３％ Ａ），流速０．８ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长２５０ｎｍ，进样量１０μＬ。对照品与样品色谱峰见图１。

２．２ 对照品及供试品溶液的制备

２．２．１ 混合对照品溶液的制备

以５０％甲醇制备 ３′－羟基葛根素０．０８０ｍｇ／ｍＬ、葛根素０．１６ｍｇ／ｍＬ、 ３′－甲氧 基 葛 根 素 ０．０４０ ｍｇ／ｍＬ、葛 根 素 芹 菜 糖 苷 ０．０４０ｍｇ／ｍＬ、大 豆 苷 ０．０４０ ｍｇ／ｍＬ、大 豆 苷 元 ０．００５ｍｇ／ｍＬ混合溶液，即得。

２．２．２ 供试品溶液制备

精密称取葛根样品粉末 ０．１ｇ，加３０％乙醇２５ｍＬ，静置３０ｍｉｎ，称量，加热 回流３０ｍｉｎ，冷却至室温，再次称质量，用３０％乙醇 水溶液补足减失的量，取上清液，０．４５μｍ 微孔滤膜 过滤，取续滤液，即得。

3 讨论

３．１ 提取条件的优化

本研究对超声波提取法与 加热回流提取法进行了比较，结果表明加热回流提 取法所得的异黄酮类成分提取率较高，故选用加热 回流提取法。本实验同时考察了不同提取溶剂、不 同料液比、不同 提 取 时 间，发 现 以３０％乙醇 溶 液 为 提取溶剂，采用２５０倍量，加热回流３０ｍｉｎ，可充分 将异黄酮类成分提取，说明该提取条件简便、合理、 可行。

３．２ 检测波长的选择

取３′－羟基葛根素、葛根素、 ３′－甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷、大豆苷、大豆苷 元的对照品溶液，用紫外分光光度计测定，于１９０～ ４００ｎｍ 波长 范 围 内 扫 描，结 果 ６ 种异黄酮成分在 ２５０ｎｍ 处有 最 大 吸 收。因 此，将检测波长设定为 ２５０ｎｍ。

３．３ 流动相的选择

对 甲 醇－０．１％醋酸 水、甲 醇－ ０．２％醋酸水、甲醇－０．５％醋酸水的流动相系统进行 考察，结果表明，甲醇－０．２％醋酸水能达到分离度的 要求，分离时 间 合 适，最 后 确 定 流 动 相 为 甲 醇（Ａ）－ ０．２％ 醋酸 水（Ｂ），梯度 洗 脱（０～２５ ｍｉｎ，２３％ Ａ； ２５～３５ ｍｉｎ，２３％ Ａ→４０％ Ａ；３５～４８ ｍｉｎ，４０％ Ａ→６５％ Ａ；４８～５０ｍｉｎ，６５％ Ａ～２３％ Ａ）。

３．４ 样品测定结果分析

实验结果表明，安徽省不 同产地之间葛根中各成分含量差异较大。实验中所 测定的１５个产地的葛根样品存在两种性状类型：一 种纤维性较强，当地药农称之为“柴性葛”；另一种粉 性较强，当 地 称 之 为“粉 性 葛”。“柴性 葛”与“粉 性 葛”均来自豆科植物野葛，仅在根的粉 性 强 弱 上 有 差 异。“粉性 葛”的 粉性明显较“柴性葛”高，且多为短粗的纺锤形，性状上易与“柴性葛”区分。 安徽省１５个产 地 中，产 于 安 徽 宁 国、青 阳、太 湖、铜陵、望江、宿松的葛根为“粉性葛”类型，异黄酮 类成分含量较低，其葛根素含量低于《中华人民共和 国药典》规 定 的２．４０％。同为“柴 性 葛”的 类 型 中， 其不同产地“柴性葛”异黄酮含量亦有明显差异，如 安徽明光地区的葛根中葛根素含量约８．１１％，而安 徽宿松地区的葛根中葛根素含量约０．５２％，其差异 可能受产地因素影响。基于含量测定结果，采用主 成分分析和聚类分析对“粉性葛”与“柴性葛”进行分 析，结果表明“粉性葛”与“柴性葛”可以在含量成分 上进行区分。因此在临床用药时除了需要关注葛根 的产地，同时需要关注葛根的性状。 葛根为药食两用中药，由于葛根的需求量巨大， 野生资源逐渐减少。考虑到“柴性葛”与“粉性葛”不 仅粉性上有差异，其所含的异黄酮化合物含量也有 明显差异。因此建议食用葛根时应选“粉性葛”，以 合理利用其根中丰富的淀粉，而药用的葛根应选 用“柴 性 葛”，以充分 利用其丰富的异黄酮化合物含量。