上海精宏分享制母液化学成分的研究

左旋多巴，即 ( －) -3- ( 3，4-基苯基) -L-丙 氨酸，具有显著的抗帕金森综合症作用，收载于 2015 年版 《中国药典》 、 《欧洲药典》等; 生 产工艺有化学合成法、植物提取法、微生物转化法 及新兴的代谢转化法; 国内以植物提取法为主， 生产原料以猫豆为主。欧洲药典记载的相关物质 ( 杂质) 有 ( 2 s) -2-amino-3- ( 2，4，5-trihydroxy phenyl) propionic acid、3-methoxy-l-tyrosine、3-methoxy-dl-tyrosine、D-dopa。从以猫豆为原料生产的 左旋多巴原料药产品中可检出 3-methoxy-l-tyrosine、 3-methoxy-dl-tyrosine。

1 材料

Bruker Dre-600 MHz 核磁共振仪 ( 德国 Bruker 公司) ; Waters2545-2767-2489 高压制备液相色谱 仪 ( 美国 Waters 公司) ; 分析型液相色谱仪 ( 美国 Agilent 公司) ; Autospec Premier 776 质谱仪 ( 美国 Waters 公司) ; XS205 电子天平 ( 瑞士梅特勒-托利 多公司) ; ＲE-52AA 旋转蒸发仪 ( 上海亚荣生化仪 器) ; HH-S 恒 温 水 浴 锅 ( 江 苏 金 坛 市 医 疗 仪 器 厂) ; ZWD-83-1 型电热熔点检测器 ( 江苏沙头文 教五 金 塑 料 厂) ; DZF-6050 真空干燥箱、DHG9246A 电热恒温鼓风干燥箱 ( 上海精宏实验设备有 限公司) ; KQ5200B 超声仪 ( 昆山市超声仪器有限 公司) 。柱色谱、薄层色谱用硅胶 ( 青岛海洋化工 厂) 。色谱仪用化学试剂为色 谱 纯，其 余 为 分 析纯。 精制母液由广西邦尔药业有限公司提供，对应 的左旋多巴原料药产品批号 20160517。

2 提取与分离

精制母液用 4%NaOH 水溶液调至 pH 6. 0，低温 真空浓缩成稠膏，60 ℃真空干燥，得干膏 5. 28 kg， 打粉，用 95% 乙 醇 回 流 提 取 3 次 ( 12、8、8 倍量) ，冷至室温，滤过，合并提取液，减压回收乙 醇，干燥，得醇提膏 250. 81 g。醇提膏用 1 500 mL 蒸馏 水 混 悬，依 次 用 1 000 mL 石 油 醚 ( 60 ～ 90 ℃ ) 、1 000 mL 乙酸乙酯、1 000 mL 正丁醇各萃 取 2 次，合并萃取液，减压回收溶剂，干燥，得相 应部位 35. 88、53. 95、87. 82 g。石油醚部位经硅 胶柱 ( 石油醚-乙酸乙酯 100 ∶ 0 ～ 1 ∶ 1) 、Sephadex LH-20 ( 氯仿-甲醇 1 ∶ 1) 、重结晶以及制备液相等 分离得化合物 1 ( 62. 95 mg) 、2 ( 46. 94 mg) 、3 ( 100. 21 mg) 、4 ( 32. 83 mg) 、5 ( 18. 11 mg) 、6 ( 62. 28 mg) 、7 ( 49. 92 mg) 、8 ( 68. 32 mg) ; 乙 酸乙酯部位经硅胶柱 ( 氯仿-甲醇 100 ∶ 0 ～ 1 ∶ 1) 、 Sephadex LH-20 ( 氯仿-甲醇 1 ∶ 1) 、制备液相等分 离得化合物 9 ( 15. 73 mg) ; 正丁醇部位经 D101 型 吸附树脂、G-25 凝胶柱 ( 甲醇-水 100 ∶ 0 ～ 4 ∶ 1) 、 制备液相分离纯化得化合物 10 ( 27. 34 mg) 、11 ( 24. 47 mg) 、12 ( 15. 89 mg) 。

3 结构鉴定

化合物 1: 无色针状结晶 ( 氯仿-甲醇) ，EIMS m /z: 412［M］+ 。1 H-NMＲ ( CDCl3，500 MHz) δ: 5. 35 ( 1H，d，J = 3. 9 Hz，H-6) ，5. 14 ( 1H，q， J = 24. 6 Hz，H-22) ，5. 03 ( 1H，q，J = 21. 9 Hz， H-23) ，3. 50 ( 1H，s，-OH) ，1. 02 ( 3H，s，H21) ，0. 99 ( 3H，s，H-19 ) ，0. 85 ( 6H，s，H26、H-27 ) ，0. 82 ( 3H，s，H-29 ) ，0. 69 ( 3H， s，H-18) ; 13 C-NMＲ ( CDCl3，125 MHz) δ: 37. 3 ( C-1) ，31. 9 ( C-2) ，71. 8 ( C-3) ，42. 3 ( C-4) ， 140. 7 ( C-5 ) ，121. 7 ( C-6 ) ，31. 9 ( C-7、8 ) ， 50. 1 ( C-9) ，36. 5 ( C-10) ，21. 2 ( C-11) ，39. 7 ( C-12) ，42. 2 ( C-13) ，56. 9 ( C-14) ，24. 3 ( C15) ，29. 0 ( C-16) ，56. 0 ( C-17) ，11. 9 ( C-18) ， 19. 4 ( C-19 ) ， 40. 5 ( C-20 ) ， 21. 1 ( C-21 ) ， 138. 3 ( C-22 ) ，129. 3 ( C-23 ) ，51. 3 ( C-24 ) ， 31. 7 ( C-25) ，21. 1 ( C-26) ，19. 0 ( C-27) ，25. 4 ( C-28) ，12. 1 ( C-29) 。以上数据与文献  基 本一致，故鉴定为豆甾醇。本一致，故鉴定为豆甾醇。 化合物 2: 白 色 蜡 状 结 晶，EI-MS m /z: 256 ［M］+ 。1 H-NMＲ ( CDCl3，500 MHz) δ: 2. 36 ( 2H， t，J = 7. 5 Hz，H-2) ，1. 63 ( 2H，m，H-15) ，1. 25br，s) ，0. 88 ( 3H，t，J = 7. 0 Hz，CH3 ) ; 13 CNMＲ ( CDCl3，125 MHz) δ: 180. 3 ( C-1) ，34. 1 ( C-2) ，24. 7 ( C-3) ，29. 1 ～ 29. 7 ( C-4 ～ 13 ) ， 31. 9 ( C-14) ，22. 7 ( C-15) ，14. 1 ( C-16) 。以上 数据与文献 基本一致，故鉴定为棕榈酸。

4 相关物质检测

参照 《欧洲药典》方法，将化合物 1～12 和 左旋多巴原料药溶液分别注入高效液相色谱仪，未 见有相同时间的出峰。 分别制订所有化合物 TLC 展开条件，然后取 化合物和左旋多巴原料药产品分别点样，在该化合 物的展开系统中展开，未出现相同位置的斑点。

5 讨论

猫豆主要含有左旋多巴、猫豆胍等成分， 但因左旋多有显著的抗帕金森综合症活性，因此 与猫豆相关的研究，大多与左旋多巴相关。以猫豆 为原料生产左旋多巴的工艺中没有化学合成工序， 不会产生新化合物，课题组从精制母液中分离得到 的 12 个化合物，溯其根源，也是猫豆的化学成分。 采用 HPLC 和 TLC 方法进行检测，均未在左 旋多巴产品中检出 12 个化合物，表明这些化合物 不残留于左旋多巴原料药产品中，即应与左旋多巴 原料药的相关物质无关。



 

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