米曲霉发酵提取之精宏设备应用。

    DHEA 主要依赖于化学合成，合成步骤复 杂，中间产物较多，DHEA 得率和纯度不易控制。相 比之下，微生物法反应条件温和，各种酶促反应可实 现 DHEA 充分游离。采用微生物发法，通过微生 物代谢酶对甾醇侧链进行专一性酶解，优化了以菜籽 甾醇、谷甾醇等植物甾醇为底物高效制备 DHEA 的工 艺。SHP-250 生化培养 箱、GZX-9240 MBE 电热鼓风干燥箱：上海精宏试验设 备有限公司；YM 75 立式压力蒸汽灭菌器：上海三申医 疗器械公司；SB-5200D 超声波清洗器：宁波新芝生物 科技股份有限公司。蛋白胨与甘薯生全粉按质量比 4%混合，再按一定 液固比加入去离子水，搅拌混匀后置于 121 ℃下灭菌 15 min 得发酵培养基，按一定体积比于发酵培养基中 接种米曲霉孢子悬浮液，发酵一段时间后高温灭菌终 止发酵，发酵后培养基冷却后于 4 000 r/min 下离心 15 min，收集沉淀于 50℃下干燥并粉碎过 60目筛得发 酵产物。

    随接种量升高，DHEA 得率呈明显 先上升后下降变化趋势。当接种量介于 4%~10%之间 时，接种量对以甘薯生全粉为原料米曲酶发酵提取 DHEA 得率有显著（p<0.05）影响；接种量超过 10%时， 继续提升接种量，DHEA 得率无显著变化；接种量为 6%时，DHEA 得率最高，达 61.32 μg/100 g。随发酵时间延长，DHEA 得率呈显 著先上升后下降变化趋势（p<0.05）。发酵 36 h 时，DHEA 得率最低，仅为 12.20 μg/100 g；发酵 72 h 时，DHEA 得 率最高，为 79.34 μg/100 g。研究表明，发酵48 h~72 h 是 米曲霉生长繁殖的高峰期，发酵时间不足，发酵液中菌 丝体绝对数量不高，产酶不足进而影响 DHEA 得率； 发酵时间太长，培养基中营养物质消耗过多，米曲酶生 长减缓甚至衰亡，可水解糖苷键等酶的产量降低[20]，导 致培养基中 DHEA 不能充分游离，最终其得率下降。