仙茅盐炙工艺的优化-DHG-9140A使用

仙茅为石蒜科植物仙茅 Curculigo orchioides Gaertn． 的干燥根茎，始载于 《雷 公 炮 炙 论》， 其性辛、温，味苦，有毒，归肝、肾经，具有 补肾助阳、益精血、强筋骨、行血消肿的功效。现 代植物化学研究表明，仙茅成分比较复杂，主要包 括酚及酚苷类、木脂素类、皂苷元及皂苷类、黄酮 类、桉烷类、脂肪族类、生物碱类、甜味蛋白、多 糖类、挥发油等; 现代药理研究显示，仙茅主 要具有抗氧化、抗骨质疏松、增强免疫、补肾壮 阳、抗炎、抗忧郁、抗老年痴呆等作用，临床 上多用于治疗骨质疏松症、乳腺增生、绝经后关节 炎、更年期综合征及阳痿、再生障碍性贫血、原发 性高血压等疾病; 中医临床上常用其炮制品以增强 补益作用。

1 材料

1. 1 仪器

Waters H-Class UPLC 超高效液相色谱 仪 ( 包括四元高压梯度泵、自动进样器、柱温箱、 蒸发光散射检测器、Empower2 数据处理工作站， 美国 Waters 公司) ; 电子天平 ( 瑞士 Mettler-Toledo 公司) ; FA1004B 型电子天平 ( 上海精密科学仪器有限公司) ; DHG-9140A 型电热恒温鼓风干燥箱 ( 上海精宏实验设备有限公司) ; DFT-100 型高速万能粉碎机 ( 浙江温岭市林大机械有限公司) 。

1. 2 试药

仙茅购自康美药业股份有限公司，经 辽宁中医药大学中药鉴定室翟延君教授鉴定为石蒜 科植物仙茅 Curculigo orchioides Gaertn． 的 干 燥 根 茎。仙茅苷对照品 ( 中国食品药品检定研究院， 批号 MUST-15062710，含有量 99. 17%) ; 苔黑 酚 葡萄糖苷对照品 ( 成都曼思特生物科技有限公司， 批 号 MUST-14041601， 含 有 量 98. 81%) 。 食 盐 ( 江苏金桥盐化集团古淮制盐有限公司，GB5461) ; 甲醇、磷酸、乙腈为色谱纯; 其他试剂均为分析 纯; 水为超纯水。

2 方法与结果

2. 1 盐炙品制备

取适量净仙茅段 20 g 置适宜容 器内，加入盐水 ( 取 0. 4 g 盐，以不同盐水比例拌 匀) 闷润，待盐水被吸尽后置炒制容器内，不同 温度下不断翻炒一段时间，取出，放凉，打 粉， 即得。

2. 2 仙茅苷、苔黑酚葡萄糖苷含有量测定

2. 2. 1 色谱条件

ACQUITY UHPLC BEH C18 柱 ( 2. 1 mm×50 mm，1. 7 μm) ; 流动相乙腈 ( A) - 0. 1%磷酸 ( B) ，梯度洗脱 ( 0 ～ 4 min，3%A; 4 ～ 5 min，5% A; 5 ～ 5. 5 min，7% A; 5. 5 ～ 6 min， 10% A; 6 ～ 8 min，11% A; 8 ～ 8. 5 min，12% A; 8. 5 ～ 9. 5 min，13%A; 9. 5 ～ 10 min，13%A; 10 ～ 13 min，15% A; 13 ～ 15 min，15% A) ; 检测波长 220 nm; 体积流量 0. 3 mL /min; 柱温30 ℃ ; 进样 量 1 μL。理论板数按仙茅苷计算应不低于 3 000。 色谱图见图 1。

2. 2. 2 对照品溶液制备

精密称取仙茅苷对照品 4. 11 mg、苔黑酚葡萄糖苷对照品 2. 21 mg，置 10 mL量瓶中，甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，稀 释得到 0. 102 75、0. 110 5 mg /mL 对照品溶液。

2. 2. 3 供试品溶液制备

称取不同条件下盐炙品 粉末 ( 过 3 号筛) 约 1 g，精密称定，置圆底烧瓶 中，精密加入甲醇 50 mL，称定质量，加热回流 2 h，取出，放冷，称定质量，甲醇补足减失质量， 摇匀，滤过。精密量取续滤液 20 mL，蒸干，残渣 加甲醇溶解，移至 10 mL 量瓶中，稀释至刻度，摇 匀，过 0. 22 μm 微孔滤膜，取续滤液，即得。

3 讨论

为了更准确地检出酚苷类成分，色谱柱考察了 ACQUITY UHPLC BEH C18 ( 2. 1 mm × 50 mm， 1. 7 μm) 和 Ultimate UHPLC AQ-C18 ( 2. 1 mm × 50 mm，1. 8 μm) ，流动相考察了甲醇或乙腈与 0. 1%磷酸或甲酸的不同比例，检测波长考察了 220、280 nm，最终确定为 “2. 2. 1”项下条件。 酚苷类是仙茅补肝肾、强筋骨的物质基础， 故选用其中含有量较高的苔黑酚葡萄糖苷和药典指 标成分仙茅苷作为评价指标，并进行加权求和 ( 权重比例设为 1 ∶ 1) ，优化仙茅盐炙工艺，具有 一定的科学性与合理性。仙茅苷和苔黑酚葡萄糖苷 作为仙茅酚苷类主要成分，含有量测定方法有薄层 层析-紫外分光光度法、高效液相色谱法、紫外分光光度法等，本实验采用UPLC法，与 HPLC 法相比操作简便，结果准确，重复性好。