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三七是一 种十分古老的药用植物， 起源于 25 万年前的第三纪 古亚热带区域，又名闹特金身、诺特参（ 音译） [1]。 三七 为云南道地药材，具有止血散瘀、消肿定痛的作用[2]， 是许多知名中成药的主要原料，如：痛 舒 胶 囊、痛 舒 片、复方丹参滴丸、丹参片等。《 本草纲目》 记载：“ 凡杖 扑伤损，癖血淋漓者，随即嚼烂罨之即止，青肿者即消 散[3] ”。 这表明三七不仅有止血作用还有活血散瘀的 神奇功效，具有双重调节作用。 大孔吸附树脂柱色谱 为常用的划段方法， 各段洗脱物中化学成分的种类、 含量、药效强弱均不一致。 目前，从大孔树脂划段，主 要成分种类和含量分析，药效等方面对三七进行系统 性研究的报道较少。 本文对三七水洗脱部位，30%和 70%乙醇洗脱部位进行研究， 旨在筛选活性部位，探 讨各部位主要成分的种类与含量，止血与活血作用强 弱，为三七标准化建设提供物质基础研究依据。
三七主根，灰褐色圆锥形，具清香 味，由云南白药集团股份有限公司创新研发中心天然 药物资源研究室提供，经资源研究室鉴定为五加科人 参属植物三七（ Panax notoginseng（ Burk.） F. H. Chen） 的干燥根；HPD-100 型大孔吸附树脂，沧州宝恩吸附 材料 科 技 有 限 公 司；三 七 素、三 七 总 皂 苷、人 参 皂 苷 Rg1 对 照品，中国药品生物制品检定研究院；色 谱 级 乙腈、甲醇，德国默克，批号：20180331；无水乙醇，国 药集团化学试剂有限公司生产， 批号：20170530。 云 南 白 药 ， 云南白药集团股份有限公司 ， 批 号 ： ZLA1614；阿司匹林肠溶 片，Bayer HealthCare Manu－ facturing S.r.l， 批号：BJ19198.； 胶原蛋白，Sigma，批 号：BPo2o1；盐酸肾上腺素注射 液，上海禾丰制药有 限公司，批号：10170102；银杏叶提取物，德国威玛舒 培博士药厂，批号：0320417；高分子右旋糖酐，玛雅试 剂有限公司，批号：MAYA-CR-6536；水合氯醛，国药集团化学试剂有限公司，批号：2015050。
旋 转 蒸 发 仪， 上海亚荣； DZF-6051 型真空干燥箱 ， 上海精宏仪器厂 ；Prac－tum224-1CN电子分析天平，赛多利斯科学仪器（ 北 京） 有限公司；JJ-2000 型电子天平，江苏常熟市双杰 测 试 仪 器 厂；UV2501分光光度计， 日 本 Shimadzu； Waters e2695 型高效液相色谱仪，美国 Waters；ELGA reservoir 75 L 纯 水 机，英 国 ELGA；全自动全血血液流变仪 MVIS-2015，重庆天海医疗设备有限公司。
SPF 级昆明小鼠， 体质量 20~22 g。 SPF 级 SD 大鼠，体质量 180~220 g。 来源于广东医学 实验动物中心[SCXK（ 粤） 2013-0002]。 动物饲养于云 南白药集团创新研发中心药理研究室 [SYXK （ 滇） K2017-0004]。
三七干燥根 6 kg，粉碎，以 70%乙醇为提取溶剂（ 料液比为 1 ∶ 5） ，采 用连续回流提取法提取 3 次，回流温度为 80 ℃，每次 2 h。 所得提取液趁热过 200 目滤布，使用旋转蒸发仪 减压浓缩（ 温度：60 ℃，真空度：0.07 MPa） ，稠膏减压 真空干燥。 三七干燥药材 4 kg（ 60 头） ，依上述方法制得浓 缩液 500 mL。 称取 4 kg 的 HPD-100 大孔吸附树脂 预 处 理，装 入 16 cm×140 cm 的 玻 璃 色 谱 柱 中，用 蒸 馏水替换。 取浓缩液均匀上样，流速 10 mL/min。 依次 用 5 倍柱体积的蒸馏水、30%和 70%的乙醇-水梯度 洗脱，流速 200 mL/min。 将各部分洗脱液使用旋转蒸 发仪减压浓缩（ 温度：60 ℃，真空度：0.07 MPa） 。 水洗 脱部位浓缩液经水浴（ 70 ℃） 蒸发至稠状，减压真 空 干燥（ 温度：70 ℃，真空度：0.07 MPa） 。 30%和 70%乙 醇洗脱部位浓缩后冷冻干燥。
对照品制备：称取 三七素对照品 10.01 mg，配置时加 70%甲醇，溶解定 容到 25 mL。供试品制备： 称取适量三七总提物和各划段 样 品，用纯水定容置至 25 mL，超声溶解，有机系滤头过 滤，取续滤液进样 10 μL。 测定方法：Waters e2695 型高效液相色谱，Ther－ mo Scientific Hypersil GOLD C18 色谱柱（ 4.6 mm×250 mm，5 μm） ；流动相为 0.3%四丁基氢氧化铵（ A） —甲 醇 （ B）（ 磷酸调 pH 4.0） ； 梯度洗脱 0～15 min，15%～ 20%A；15～25 min，20%～15% A；体积流量 1 mL/min； 进样量 10 μL；柱温 25 ℃；检测波长 220 nm[4]。
对照品溶 液的制备：精密称取人参皂苷 Rg1 对照品 适量，用甲 醇配制成浓度为 0.2 422 mg/mL 的对照品溶液。 供试品溶液 的 制 备：取 三 七 提 取 物 20 mg，精 密 称定，加入甲醇 25 mL，超声混匀，滤过，取续滤液。 紫外分光光度法标准曲线制备：分别精密吸取对 照品溶液 0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL 置具塞磨口试 管中，挥干甲醇后，加入新鲜配制的 5%香兰素-冰醋 酸 溶 液 0.2 mL，高 氯 酸 0.8 mL，于 60℃水 浴 加 热 15 min，冰水浴 冷 却 后，加 冰 醋 酸 5 mL 摇 匀，于 紫 外 分 光光度计 545 nm 处进行测定，以吸光度值 Y 为纵坐 标，以人参皂苷 Rg1 含量 X（ mg） 为横坐标绘制标准曲 线。 供试品反应与测定： 精密吸取供试品溶液 0.2 mL，置具塞磨口试管中，挥干甲醇后，加入新 鲜配制 的 5%香兰素-冰醋酸溶液 0.2 mL， 高氯酸 0.8 m，于 60 ℃水浴加热 15 min， 冰水浴冷却后， 加冰醋酸 5 mL 摇匀，以不加供试品的试剂做空白对照，于紫外分 光光度计 545 nm 处进行测定[5-6]。
对照品的 制备： 称取三七总皂苷对照品 63.01 mg， 配置时加 70%甲醇，溶解定容到 25 mL。 配置浓度：2.5 204 mg/ mL。 标 示 含 量 ：R1：7.4%、Rg1：26.3%、Re：3.7%、Rb1： 27.7%、Rd：7.6%。 供试品溶液的制备：称取 30%乙醇洗脱部位冻干 粉末 50.7 mg，30%甲醇定容置至 25 mL， 超声溶解， 有机系滤头过滤，取续滤液进样 10 μL；称取 70%乙 醇洗脱部位 50.3 mg， 甲醇定容置至 25 mL， 超声溶 解，滤头过滤，取续滤液进样 10 μL。 HPLC 色谱条件：色谱柱：Ecosil-C18 柱（ 250 mm× 4.6 mm，5 μm） ；流 速：1.0 mL/min；柱 温：30 ℃；进 样 量：10 μL；检测波长：203 nm；流动相：乙腈-水溶液， 按表 1 进行梯度洗脱[7]。
提取得到干燥的 总提物 1.38 kg，得率 23%。 水洗脱部位 370 g，30%乙 醇洗脱部位 82 g，70%乙醇洗脱部位 330 g，得率分别 为：9.25%、2.05%、8.25%。
对三七总提物和 各划段样品进行了三七素含量检测。 结果显示，总提 物和水洗脱部位中含有三七素，含量分别为 1.13%和 2.78%。30%和 70%乙醇洗脱部位均未检测到三七素。如表 2 所示。
三七总皂 苷测定结果显示，总提物中含量为 32.51%。 70%乙醇 洗脱部位中含量最高，达 83.61%。 30%乙醇洗脱部位 中含量为 52.39%，水洗脱部位中含量为 0%。 如表 2 所示。 2.4 HPLC 法测定 5 种主要皂苷的含量 与三七总 皂苷对照品比较，对 30%和 70%乙醇洗脱部位中的 5 种 主 要 皂 苷（ 三 七 皂 苷 R1，人 参 皂 苷 Rg1，人 参 皂 苷 Re，人参皂苷 Rb1，人参皂苷 Rd） 进行了测定。 5 种皂 苷在 70%乙醇洗脱部位中均有检出， 而 30%乙醇洗 脱部位中仅检出三七皂苷 R1，人参皂苷 Rg1，人 参 皂 苷 Re。含量计算如表 2 所示。
提取与大孔树脂柱划段研究中，采用 70%乙醇提 取，能较大范围地提取三七化学成分。 根据大孔树脂 柱特性，水洗脱部位富集了较多强极性化合物，如：三七素、多糖、强极性苷类等。随着洗脱剂中乙醇含量增 加， 所得洗脱物极性减小，30%和 70%乙醇洗脱部位 能较多地富集核苷、黄酮苷、三萜苷及其苷元等化合物。
在本实验设计与条件下，水洗脱部位的三七素含 量最高， 止血作用最强，30%和 70%乙醇洗脱部位中 主要皂苷的种类与含量存在着较大差异，药效研究显 示 ，30%乙醇洗脱部位为抗血 栓的主要活性部位 ， 30%和 70%乙醇洗脱部位均为活血散瘀作用的主要 活性部位。本文从大孔树脂划段，成分比较分析，药效 对三七进行了系统地实验，在一定程度上丰富了三七 的研究成果。 后期我们将对活性部位展开进一步研 究，为三七标准化的建立提供理论依据。
