聚合物胶束的体内测评

紫杉 醇（ＰＴＸ）可以 作 用 于 细 胞 分 裂 过 程 中 组 成纺锤体的微管蛋白的特定部位从而起到防止其解 聚的作用，在细胞分裂过程中，不能由微管蛋白迅速 合成纺锤体微 管，使 细 胞 的 分 裂 永 远 停 留 在 Ｇ２和 Ｍ 期，导致其 无 法 复 制，从而起到杀死癌细胞的作用。而 ＰＴＸ 的溶解性问题是其制剂的首要问题。另外，ＰＴＸ 作为细胞毒性的抗肿瘤药物，因 为缺乏肿瘤靶向性，甚至导致全身性毒性，特别是 中性粒细胞减少症等免疫性疾病，这使得其临床应 用受到很大限制。

十八胺、Ｎ，Ｎ 一二甲基甲酰胺、甲酰 胺、Ｎ，Ｎ 一二环己基 碳 二 亚 胺、ＦＡ、ＨＡ、１－（３－二甲 基丙基）－３－乙基 碳 二 亚 胺 均 购 自 麦 克 林；硼 酸 购 自 天津市恒兴化学试剂制造有限公司；十水合四硼酸 钠、二甲亚砜均购自国药集团化学试剂有限公司； ＮＨ２－ＰＥＧ２０００－ＣＯＯＨ、透 析袋均购自北京索莱宝 科技有限公司；ＰＡＭＡＭ 购自威海晨源分子新材料 有限公司。ＳＫＯＶ－３细胞株及Ｂ１６细胞株购自南昌 乐悠生物科技有限公司；ＰＴＸ 购自大连美仑生物技 术有限公司。

Ｈ－Ｊ磁力加热搅拌器（巩义市裕华仪 器有限责任公司），ＰＨ４００基础型酸度计（安莱利斯 有限公司），ＴＹ９６－１１ＩＶ 超声波细胞粉碎机（宁波新艺生物科技葛粉有限公司 ），高 速 冷 冻 离 心 机 （Ｔｈｅｒｍｏ），电热鼓风干燥箱（上海精宏）， ＧＯＬＤ－ＳＩＭ 冷冻干燥机（美国金西盟国际集团），小 动物活体成像仪ｃａｐｌｉｐｅｒ（ｌｕｍｉｎａｓｅｒｉｅｓ），激光共聚焦显微镜（德国 Ｌｅｉｃａ公司）。

利 用 ＰＡＭＡＭ 的氨基末端与异硫氰酸荧光素的异硫氰 基可以共价结合的化学反应，制备荧光标记物。称 取 ＰＡＭＡＭ 适量，溶于 ＰＢＳ缓冲液中（ｐＨ＝７．４）， 缓慢滴加 异 硫 氰 酸 荧 光 素 的 丙 酮 溶 液。摩 尔 比 为 ＰＡＭＡＭ：异硫氰酸荧光素＝１∶１．２。避光 磁 力 搅 拌３６ｈ，透析袋中透析３ｄ，离心除去未反应的异硫 氰酸荧光素，冻干得到异硫氰酸荧光素标记的 ＰＡ－ ＭＡＮ 聚合物。异硫氰酸荧光素，在４８８ｎｍ 激发波 长下，显示特征绿色荧光。称取硼砂１．８９５３ｇ、硼酸 １．２３５７ｇ溶于１Ｌ蒸馏水中，得到ｐＨ＝８的缓冲溶 液，避 光 保 存。 将 ＰＡＭＡＭ ２．０７９６ ｇ 和 ＰＥＧ ０．１４１０ｇ溶于２０ｍＬ硼砂－硼酸缓冲液中，室温，避 光，磁力搅拌１２ｈ。将反应混合物转移至５０Ｋｄ截 留分子量的 超 滤 管 中 超 滤，转 速 为４０００ｒｐｍ／ｍｉｎ， ３０ｍｉｎ／次，共超 滤 ７ 次，收 集 上 层 液 体，冻 干 后 称 重、密封保存。按参考文献的方法合成 ＨＡ－Ｃ１８， 并进一步合成 ＦＡ－ＨＡ－Ｃ１８，冻干 后 称 重、密 封 保 存。称取 ＰＴＸ５０ｍｇ，溶于２．５ｍｌ无水乙醇中，用 无水乙醇溶 解 的 ＰＴＸ 缓慢 滴 加 至 ＦＡ－ＨＡ－Ｃ１８的 溶液中，磁 力 搅 拌 ２４ｈ，冰浴 超 声 １０ ｍｉｎ，溶液 于 ４０００ｒｐｍ／ｍｉｎ离心 ３０ ｍｉｎ，上清 液 经 过 ０．４５μｍ 滤膜，得到 ＦＡ－ＨＡ－ＰＴＸ混合物。在上述混合液中 加入 Ｎ－羟基琥珀酰亚 胺 和１－（３－二甲 氨 基 丙 基）－３－ 乙基 碳 二 亚 胺 盐 酸 盐，室 温 避 光 反 应 １２ｈ，加 至 ＰＥＧ－ＰＡＭＡＭ 的水溶 液 中。用 盐 酸 调 节 ＰＨ 值至 ８．０，室温避光反应１２ｈ。反应结束后，用蒸馏水透 析，离心除杂质，冻干后称重、密封保存。

随 着 时 间 的 延 长，荧 光 标 记 载 ＰＴＸ胶束的肿瘤部位荧光蓄积逐渐增多，均显著高 于对照组，尤其在１２ｈ时及２４ｈ时最多，说明荧光 标记载 ＰＴＸ胶束的肿瘤靶向性较好。，载 ＰＴＸ胶束（给药组）的抑瘤效果 与小分子 ＰＴＸ（阳性 组）类 似，随着时间的延长，给 药组和阳性组肿瘤的体积逐渐降低，从接种２０ｄ开 始，给药 组 肿 瘤 体 积 较 阳 性 组 略 有 降 低，说 明 载 ＰＴＸ胶束的抑瘤效果明显，且略强于小分子 ＰＴＸ。载 ＰＴＸ胶束组小鼠的平均生存时 间随着时间的延长无明显变 化，阳 性 组 和 对 照 组 小 鼠的平均生存时间逐渐降低，阳 性 组 小 鼠 的 平 均 生存时间显著长于对照组，说明载 ＰＴＸ 胶束组小鼠的 平均生存时间明显长于对照组和小分子 ＰＴＸ组。载 ＰＴＸ胶束组小鼠的抑瘤率显著 强于对照组，略强于 阳 性 组；载 ＰＴＸ 胶束 组 小 鼠 的 平均生存时间显著长于对照组及阳性组；载 ＰＴＸ 胶 束组小鼠 的 生 长 期 延 长 率 显 著 高 于 对 照 组 及 阳 性 组。

恶性肿瘤已经成为影响人类健康的主要疾病之 一，据统计，２０１０年有超过１２００万人被确诊患上癌 症，有７６０万病 人 死 于 各 种 癌 症。我 国 流 行 病 学 调 查显示，恶性肿瘤的死亡率居城市和农村全部死亡 病例之首，并有明显上升趋势。如今，恶性肿瘤的治 疗方法中，化疗是主要方法之一，但化疗药物又 存在缺乏靶向性和毒副作用大的缺陷。所以设计构 建毒副作用小，靶向性高的抗肿瘤靶向载体系统具 有很好的药学研究前景。分子物质和脂质在肿瘤组织透过性增强及滞留 效应 称 作 实 体 瘤 的 高 通 透 性 和 滞 留 效 应 （ＥＰＲ），ＥＰＲ效应促进了大分子类物质在肿瘤 组织的选择性分布，可以增加 药 效 并 减 少 系 统 副 作 用，本研究基于 ＥＰＲ 效应原理，将高分子聚合物与 小分子化疗药物的偶联物，通 过 药 剂 学 手 段 结 合 到 高分子材料表面，有效地缓解 了 传 统 纳 米 粒 的 突 释 效应，因而具有独特 的 优 势。并 且 通 过 双 靶 向 载 药 系统设计进一步提高 ＰＴＸ抗肿瘤作用，并改善其毒 副作用。本研究中采用了 ＦＡ 和 ＨＡ 作为肿瘤靶向 基团，对 ＰＴＸ－ＰＡＭＡＭ 进行了双靶向的修饰，并组 装成胶束进行了体内评价。



 

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